梅里埃API 50CHB G+芽胞桿菌鑒定試劑盒

包裝規(guī)格  10 測試/盒

檢驗原理  API 50 CH 試條由 50 個微量孔組成，用以研究碳水化 合物及其衍生物（heterosides，多元醇，糖醛酸）底物 的發(fā)酵。用 API 50 CHB 培養(yǎng)基接種試條，使底物水解， 然后檢測發(fā)酵試驗。 試條孵育過程中，試條上的小管內(nèi)在厭氧環(huán)境下產(chǎn)酸， pH 改變而使培養(yǎng)基中指示劑顏色變化，由此可觀察到 發(fā)酵作用。試條上第一孔中不含任何活性成分，以此作 為陰性控制。

試劑盒組成  

API 50CH 試條 10條

培養(yǎng)盒 10個

結(jié)果報告單 10張

API 50CHB 產(chǎn)品說明書 1份

API 50CHB 操作指引卡 1張

懸浮液（2mL） 10安瓿

芽孢桿菌培養(yǎng)基（50CHB Medium） 10安瓿

2 號麥?zhǔn)媳葷峁?1瓶

試條的成分及其儲存條件  API 50CHB 試條在有效期（有效期標(biāo)在試劑盒上）內(nèi)， 應(yīng)貯存于 2-8℃。

檢驗方法  

1. 菌株培養(yǎng) 

? 檢查菌株純度 

? 在適宜的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)菌株。如菌株生長過于 緩慢，應(yīng)該用兩個平板經(jīng)行培養(yǎng)，以保證足夠的菌 量用于下列操作。 

? 菌株培養(yǎng)條件： 低溫菌：20℃培養(yǎng) 18-48 小時； 中溫菌：25℃培養(yǎng) 16-18 小時； 高溫菌：55℃培養(yǎng) 12-16 小時； 如不知測定菌的最佳培養(yǎng)條件，請用多個平板在不 同溫度下培養(yǎng)。

2. 試條的準(zhǔn)備 

? 準(zhǔn)備一個培養(yǎng)盒（盤和蓋子），倒入約 10ml 蒸餾 水（不含其他雜質(zhì)或 Cl2，CO2 揮發(fā)性氣體的水） 於盤的蜂窩小凹中，造成一個濕室。

? 在盤的沿邊寫上菌株號(不要寫在蓋上，以免錯放)。

? 從包裝袋中取出 2 個試條（0-19，20-39），再把它 們分為 4 個小試條（0-9，10-19，20-29，30-39）并 全部放在孵育盒底盤中。取出另一個小試條（40-49） 放在孵育盒底盤中上述 4 個試條的后面，即完成試 條的準(zhǔn)備。

3. 接種物的準(zhǔn)備 

? 使用棉試子從固體培養(yǎng)基上收集菌株，加入至懸 浮液中，制成高濃度菌懸液（S）。 

? 往0.85%NaCl（5mL）中加入高濃度菌懸液（S）， 制備成濁度相當(dāng)于2McF 的菌懸液，記錄滴數(shù) n。 

? 打開 50CHB 培養(yǎng)基安瓿，加入 2n 滴上述菌液接種。 

? 所制備的菌懸液應(yīng)立即使用。

4. 試條接種 

用無菌加樣器按下述要求將菌懸液加到試條上的 50 個 管中： 

? 將孵育盒底盤向前輕輕傾斜。 

? 使加樣器頭靠在杯的邊緣加入菌懸液，避免產(chǎn)生氣 泡。 

? 僅加滿管的部分，管的上部（杯）不要加菌懸液， 這樣管內(nèi)可保持厭氧環(huán)境 

? 當(dāng)菌懸液接種完成后，液面應(yīng)避免出現(xiàn)新月形的凹 陷或凸起。 

? 根據(jù)被檢細菌的生長需要，將試條放在適當(dāng)?shù)臏囟?進行孵育：30°C/37°C 培養(yǎng) 48h 或 55°C 培養(yǎng) 24h。 如果最適溫度不詳，則培養(yǎng)在中溫情況。

5. 判讀試條 

? 根據(jù)細菌和所研究反應(yīng)的類型，在達到了規(guī)定的孵 育時間后(如 24 小時，48 小時)，二次判讀試條。

— 低溫菌：培養(yǎng) 48 和 96 小時； 

— 中溫菌：培養(yǎng) 24 和 48 小時； 

— 高溫菌：培養(yǎng) 24 小時； 對生長較快的高溫菌必須培養(yǎng) 3或6 小時后讀， 因為培養(yǎng) 2 小時后判讀不好解釋。 ? 以陽性（+），陰性（－），可疑（？）來解釋每 一個試驗，將結(jié)果記錄在結(jié)果記錄單上。 

? 陽性反應(yīng)：酸化，由于培養(yǎng)基所含酚紅變黃而呈現(xiàn) 黃色；七葉靈測定（第 25 號管）由紅色變成黑色， 為陽性。

? 偶爾會出現(xiàn)第二次讀條時陽性結(jié)果變?yōu)殛幮?，這是 因為從蛋白胨產(chǎn)氨中和所產(chǎn)酸而導(dǎo)致，這些結(jié)果應(yīng) 被記錄為陽性。 

鑒定 

以陽性（+），陰性（－），可疑（？）來解釋每一個 試驗，將結(jié)果記錄在結(jié)果記錄單上。 

鑒定：使用鑒定軟件 APIweb： 在鍵盤上輸入 50 個生化反應(yīng)結(jié)果?？傻靡韵滦畔ⅲ?nbsp;

— 被鑒定細菌的種名 

— 鑒定%越接近 100%，T 值越接近 1，鑒定結(jié)果越好。

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